genÓmica funcional mediante silenciamiento gÉnico

Este estudio se basa en la construcción de un  pez cebra que lleva bloqueado de forma temporal un gen de manera que se puede analizar la pérdida de función del mismo. Para ello, se puede bloquear tanto la traducción de su mRNA como eventos de procesamiento nuclear, en particular el procesamiento del pre-mRNA. Para producir ambos tipos de bloqueo se utilizarán oligos antisentido denominados morfolinos (GeneTools LLC.) diseñados por ZF BioLabs en base a los objetivos del cliente y la secuencia del gen que se desea silenciar. Estos oligos serán microinyectados en embriones de pez cebra en el estadio de 2-8 células, tras realizar una lectura de los embriones y seleccionar las mejores puestas. La microinyección también se puede realizar en otros momentos del desarrollo, en función del estadio en el que se exprese el gen de interés.

Una vez conseguido el bloqueo génico se analizarán los embriones microinyectados y se realizará un estudio del fenotipo de pérdida de función obtenido. Dicho estudio implica la visualización de los embriones de forma individual (dispuestos en placas de 96 pocillos) y el estudio de diferentes end-points que engloban aspectos morfológicos, funcionales, de letalidad y de crecimiento embrionario

La confirmación de que el bloqueo se ha producido de forma eficiente se realizará por western blot en el caso del bloqueo de la traducción del mRNA y por RT-PCR en el caso del bloqueo del procesamiento alternativo del mismo.